Secuenciación ADN

Responsable: M. C. Nut Jovana Liahut

El Laboratorio de Secuenciación de ADN abrió sus puertas en 2004 con la misión de apoyar al personal académico del INECOL en la obtención de datos moleculares para el desarrollo y aplicación de la investigación científica que se realiza en el Instituto. Esto se enmarca en su compromiso institucional de generar, transferir y difundir el conocimiento científico en torno a la ecología y la diversidad biológica en beneficio de la sociedad.

Con este fin, el Laboratorio ha modernizado su infraestructura con la incorporación de un Secuenciador SeqStudio de 4 capilares, equipo de última generación que, respaldado por un equipo humano altamente capacitado, permite llevar a cabo la secuenciación de ADN con mayor eficacia mediante electroforesis capilar.

La secuenciación Sanger es la tecnología estándar por su alta precisión, capacidad de lecturas largas y flexibilidad para una amplia gama de aplicaciones. El análisis de fragmentos de ADN, por su parte, habilita desde genotipificación e identificación de especies hasta tamizaje de organismos y perfiles de expresión génica. Entre las aplicaciones que pueden realizarse en el equipo destacan:

  • Identificación y descripción de especies

  • Establecimiento de relaciones filogenéticas entre especies

  • Identificación de patrones de distribución de variación genética dentro y entre poblaciones

  • Análisis de procesos ecológicos y evolutivos en poblaciones silvestres

  • Secuenciación Sanger de novo, dirigida y de plásmidos

  • Genotipificación de polimorfismos de un solo nucleótido (SNP)

  • Confirmación de secuenciación de nueva generación (NGS)

  • Confirmación de edición genómica por CRISPR-Cas9

  • Análisis de inestabilidad de microsatélites (MSI)

  • Detección y análisis de variantes somáticas de bajo nivel

Secuenciador automático de ADN SeqStudio™ Genetic Analyzer (Applied Biosystems™)

El SeqStudio™ Genetic Analyzer es un sistema de electroforesis capilar, basado en fluorescencia, que ofrece secuenciación Sanger y análisis de fragmentos de ADN con calidad y precisión. El equipo procesa placas de hasta 96 muestras y permite realizar ambos tipos de análisis en una misma corrida, sin necesidad de reconfiguración

Secuenciador SeqStudio™ Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) del Laboratorio

Ejemplo de Electroferograma obtenido por secuenciación Sanger con el SeqStudio™ Genetic Analyzer

  • Electroforesis capilar de fragmentos de ADN generados por PCR para secuencias de ADN generados con el Kit de secuenciación de ciclos BigDye™ Terminator v3.1 de Thermofisher

  • Electroforesis capilar de fragmentos de ADN generados por PCR para análisis de fragmentos de ADN marcados con primers fluorescentes ADN etiquetados con 6-FAM™, VIC™, NED™, PET™ y LIZ™

  1. Preparar las muestras siguiendo las especificaciones de esta guía.

  2. Realizar la solicitud del servicio a través de la plataforma SIII del INECOL; completar el registro y el pago.

  3. Llenar el formulario para registrar las muestras (documento adjunto). Enviarlo al correo: nut.liahut@inecol.mx.

  4. De ser posible, usar el programa Plate Manager (archivo incluido; ejecutar SETUP de la carpeta Plate Manager 2.1.1) para el registro de la placa. Una vez completado el registro, guardar el archivo .psm y enviarlo al correo: nut.liahut@inecol.mx.

  5. Entregar las muestras en el Laboratorio de Secuenciación de ADN (INECOL, Campus II, Edificio F). Se recomienda transportar las muestras en refrigeración con hielo y protegidas de la luz.

  6. Favor de incluir notas o comentarios particulares sobre las muestras.

  7. Los resultados serán enviados a todos los correos registrados en el formulario.

M. en C. Nut Jovana Liahut

nut.liahut@inecol.mx